Qual è il metodo di rilevamento dell'attività della proteasi alcalina?
Qual è il metodo di Proteasi alcalina rilevamento di attività?
L'attività enzimatica si riferisce alla capacità di un enzima di catalizzare determinate reazioni chimiche. L'entità dell'attività enzimatica può essere espressa dalla velocità di una determinata reazione chimica che catalizza in condizioni corrispondenti. Misurazione dell'attività di LiaoningProteasi alcalinaL'enzima misura in realtà la velocità della reazione chimica catalizzata dall'enzima stesso. La velocità della reazione enzimatica può essere espressa dalla diminuzione del substrato di reazione o dall'aumento del prodotto per unità di tempo. Per motivi di sensibilità, si misura solitamente la quantità di prodotto prodotta per unità di tempo. Poiché la velocità della reazione enzimatica può diminuire gradualmente il suo valore di incremento nel tempo, per misurare correttamente l'attività enzimatica è necessario determinare la velocità iniziale della reazione enzimatica.
Principio diProteasi alcalinaPrincipio di determinazione dell'attività del metodo Folin
Proteasi alcalinaPuò catalizzare l'idrolisi della caseina in tirosina in condizioni alcaline. La tirosina è un amminoacido contenente un gruppo ossidrilico fenolico e può reagire con la Folin (una miscela di acido fosfotungstico e acido fosfomolibdico). (Reazione Folin-fenolo: il reagente Folin è estremamente instabile in condizioni alcaline ed è facile da ridurre quantitativamente con composti fenolici per produrre una miscela di blu di tungsteno e blu di molibdeno, che mostra una diversa tonalità di blu.) Utilizzando la colorimetria, ovvero la quantità di tirosina prodotta può essere determinata e la quantità di tirosina prodotta dall'idrolisi della caseina da parte di Liaoning.Proteasi alcalinain un'unità di tempo viene utilizzata per esprimere l'attività enzimatica, calcolando così l'attività enzimatica.
Procedura sperimentale per la determinazione diProteasi alcalinaattività
Preparazione della soluzione enzimatica: pesare accuratamente 1 g (±0,001) di polvere enzimatica secca, aggiungere 10 mL di soluzione tampone (2.2.5), sciogliere in un piccolo becher e mescolare con una bacchetta di vetro. Dopo un po' di riposo, versare con cautela la soluzione dello strato superiore in un matraccio tarato. Al centro, aggiungere una piccola quantità di soluzione tampone alla parte sedimentata, mescolare e sciogliere 4 volte in questo modo e infine trasferire il tutto in un matraccio tarato da 100 mL. Portare a segno con la soluzione tampone, agitare bene e filtrare con quattro strati di garza. Aspirare 5 mL del filtrato, trasferirli in un matraccio tarato da 100 mL, diluire fino al segno con acqua distillata e diluire il liquido enzimatico a un livello 2000.
Definizione diProteasi alcalinaattività
Definizione diProteasi alcalinaunità di attività: 1 grammo diProteasi alcalinala polvere può produrre 1 microgrammo di tirosina al minuto in condizioni di pH 10 e 40°C, che è considerato un'unità di attività enzimatica.
Precauzioni per la determinazione diProteasi alcalinaattività
1. La temperatura, il pH e il tempo della reazione enzimatica hanno un impatto diretto sul numero di legami peptidici idrolizzati, quindi devono essere rigorosamente controllati.
2. Dopo aver terminato la reazione con acido tricloroacetico, il filtrato ottenuto filtrando la miscela di reazione deve essere limpido.
3. Poiché il reagente Folin è sensibile all'ambiente acido e soggetto a variazioni, durante la misurazione è necessario aggiungere una soluzione di carbonato di sodio per creare un ambiente alcalino, quindi aggiungere il reagente Folin per garantirne il normale funzionamento.
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