Metodi di prova per il rilevamento del Bacillus subtilis
B. sottile
Bacillus subtilisè un comune microrganismo che viene spesso utilizzato nell'industria dei mangimi, vale a dire nella sua produzione e anche come additivo dopo la produzione. Il suo rilevamento è fondamentale per garantire la qualità e la sicurezza dei mangimi. Di seguito verrà fornita un'introduzione dettagliata ai vari metodi di rilevamento, condizioni e standard di test perBacillus subtilisnell'alimentazione. Ogni metodo ha i suoi vantaggi e svantaggi, pertanto l'utente deve tenere conto della situazione specifica e dello scenario di applicazione.
Metodo di coltivazione tradizionale
Elaborazione del campione: pesare una certa quantità di campione, aggiungere diluente per la miscelazione e trattamento ultrasonico per garantire il rilascio e la dispersione diBacillus subtilis.
Diluizione: diluire in gradiente il campione elaborato per garantire che ogni diluizione del campione possa essere ricoperta uniformemente dal terreno di coltura.
Inoculazione: applicare il campione diluito su una piastra di agar nutritivo, etichettare il numero di analisi, la data e il livello di diluizione.
Coltivazione: posizionare le piastre inoculate in un incubatore a temperatura costante di 37 ℃ per 16-20 ore e osservare la crescita delle colonie batteriche.
Osservazione delle caratteristiche delle colonie: Le colonie diBacillus subtilisdi solito presentano forme ruvide e irregolari su terreni di coltura solidi, con colonie più grandi di colore bianco latte o bianco grigiastro.
Identificazione biochimica: attraverso una serie di test biochimici come il test dell'ossidasi, il test degli enzimi catalitici, il test di liquefazione della gelatina e il test di riduzione dei nitrati, confermare ulteriormente se i batteri isolati sonoBacillus subtilis.
Metodo di biologia molecolare
Rilevamento PCR: la presenza diBacillus subtilisviene rilevato amplificando la sua sequenza genica specifica tramite reazione a catena della polimerasi (PCR). Questo metodo ha un'elevata sensibilità e una forte specificità, ma richiede attrezzature costose e conoscenze professionali.
PCR quantitativa a fluorescenza (qPCR): Rilevamento quantitativo della presenza diBacillus subtilisamplificando sequenze geniche specifiche, con elevata sensibilità e specificità, ma che richiede anche attrezzature professionali e conoscenze operative.
Metodi immunologici
Saggio immunoenzimatico (ELISA): riflette indirettamente il contenuto diBacillus subtilisanticorpi specifici in un campione rilevando la loro reazione di legame con gli antigeni. Questo metodo ha un'elevata sensibilità, ma può essere influenzato dalla qualità dei reagenti e dalle procedure sperimentali.
Metodo delle perle immunomagnetiche: utilizzo di perle immunomagnetiche per catturare specificamenteBacillus subtilise quindi eseguire il rilevamento. Questo metodo ha anche un'elevata sensibilità e specificità, ma l'operazione è più complessa.
